适用场景
制定或复核科研qPCR实验方案。本文依据MIQE 2.0整理流程节点，具体检测方法的验收标准需在实验前明确。[1]
所需物料
合适的模板、引物或探针、qPCR试剂、适配仪器的光学耗材，以及方案要求的对照或标准材料。
操作流程
1. 写明研究问题、样本分组、实验单位和重复安排。
2. 记录从样本处理到模板制备的过程；RNA起始的实验还需记录逆转录条件。
3. 完成检测方法验证，并保存所用试剂、序列和程序信息。
4. 根据目的安排无模板对照、必要的无逆转录对照及相应标准或质量控制材料。
5. 检查扩增曲线与适用的特异性证据，再按预先说明的定量方法分析。
6. 保存原始数据、分析设置及结果处理记录，形成可复核的报告。[1]
关键检查点
□ 样本身份、板位和反应记录一致。
□ 对照结果已检查；异常有记录及处理依据。
□ 方法的效率、适用范围等验证信息可追溯。
□ 根据定量方法记录效率校正、检测限与动态范围；将Cq转换为有明确依据的定量结果。[1]
□ 分析设置、排除数据的理由和归一化方法有说明。
□ 原始数据与最终图表一同归档。
常见问题
技术重复能否替代独立生物学样本？两者回答的问题不同，应在设计和报告中分别说明。
只有Cq表格是否足够？建议同时归档曲线、分析设置与必要的实验记录，便于复核。
实验记录
实验目的____；样本分组____；对照安排____；方法版本____；分析方法____；异常及处理____。
参考资料
[1] Bustin SA等，MIQE 2.0: Revision of the Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments Guidelines。Clinical Chemistry，2025，71(6):634–651。DOI 10.1093/clinchem/hvaf043。
MIQE 2.0原文
https://www.gene-quantification.de/bustin-et-al-miqe-2.0-clinical-che…
本文是操作与记录清单，完整要求及不同定量方法的说明请查阅原文。
资料核对日期：2026-09-12。