项目方法

琼脂糖凝胶电泳:操作流程与条带判读

根据片段范围准备凝胶和Marker,核对上样、电泳与成像条件,保存完整原始结果。

更新时间 2026-09-12 · 发布 2026-09-12

适用场景

检查常规科研DNA片段的大小与分离表现。本文根据Addgene公开流程整理,凝胶和电泳条件需结合片段范围、装置与染料说明确定。[1]

所需物料

琼脂糖、电泳缓冲液、上样缓冲液、合适的DNA Marker、检测染料、制胶装置、电泳槽和成像设备。

操作流程

1. 明确预计片段范围及目的:检查产物,或为后续回收进行分离。

2. 选择适用胶浓度与Marker,按相应流程制胶,检查上样孔和明显气泡。

3. 整理泳道表,准备样本及上样缓冲液,缓慢上样,避免刺破胶孔。

4. 核对电极方向及运行条件后开始电泳,记录过程异常。

5. 断电后取胶,按染料和设备要求成像;用Marker辅助估计片段大小。

6. 保存完整原始图像、泳道信息及成像条件。[1]

关键检查点

较小片段与较大片段对凝胶浓度的需要不同,应围绕需要分辨的范围选择。过量上样或不适合的运行条件可能影响分离表现。[1]

后续需要回收DNA时,减少不必要的紫外照射。使用紫外光源时按设备要求做好眼睛和皮肤防护。[1]

常见问题

条带靠得太近:复核片段大小、凝胶浓度与分离条件。

条带形态异常:同时检查上样量、样本情况和运行记录,不凭图像中的单一现象直接定因。

只有目标附近裁剪图是否方便复核?建议同时保存未裁剪原图及完整泳道表。

实验记录

胶浓度____;缓冲体系____;Marker____;泳道表____;运行条件____;染料____;成像文件____。

参考资料

[1] Addgene,Agarose Gel Electrophoresis,页面标注更新日期2018-02-20。

https://www.addgene.org/protocols/gel-electrophoresis/

本整理未将原文电压或染料配方设为通用参数;按实际装置与试剂条件执行。

资料核对日期:2026-09-12。